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Polybrene(聚凝胺，hexadimethrine bromide)是一种多聚阳离子聚合物，常用于哺乳动物细胞的DNA转染实验以增强脂质体的转染效率。Polybrene目前广泛用于逆转录病毒介导的基因转染，慢病毒介导的基因转染，作用机理可能是通过中和细胞表面唾液酸与病毒颗粒之间的静电排斥从而促进吸附作用。Polybrene也是一种有名的抗肝素剂(肝素拮抗剂)，常用来生产非特异性凝集的红细胞。另外Polybrene也多用于蛋白测序，因为小剂量的Polybrene在自动测序分析可明显改善多肽的降解现象。PVDF膜加入polybrene还能提高膜的亲和性。

本制品以溶液形式提供，粉末用0.9% NaCl配制成10mg/mL的溶液，并用0.22μM滤膜过滤除菌。使用时一般按1:1000～1:2000稀释，依细胞种类不同稀释比例不同，具体查阅相关文献。

• 实验1：逆转录病毒感染(Retroviral Infection)
  
  • 重组逆转录病毒原液的制备：取5mL生长培养基(5%血清)加入含单层转染逆转录包装细胞的100mm培养盘内。孵育24h后，吸去培养液并用0.45μm滤器过滤。
    
  • 待感染细胞的培养：100mm培养盘内加入10mL完全培养基，细胞密度为5×10⁵/盘。
    
  • 病毒感染：细胞培养24h后，吸去完全培养液。用含polybrene的2mL病毒上清(或将病毒原液稀释到2mL)感染细胞，polybrene的终浓度为5～10μg/mL。37℃孵育3-6h。
    
  • 收集病毒颗粒：加入8mL完全培养基。培养2～3天后，收集培养基上清，处理得到病毒颗粒。
• 实验2：转染
  
  • 完全生长培养基培养细胞，培养细胞密度约50%；
    
  • 孵育细胞18-24h后准备DNA-培养基- Polybrene混合液，按如下操作制备混合液：
    ① 添加完全培养基(60mm培养皿2mL，100mm培养皿3mL)，37℃预热；
    ② 添加10ng～10μg质粒轻轻混匀；
    ③ 加入Polybrene至终浓度为5～10μg/mL。轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。
    
  • 去除培养基，在细胞中加入DNA-培养基-Polybrene溶液，在37℃孵育细胞6-20h。细胞培养的前6h内约每1.5h轻柔混匀。
    
  • 去除DNA-培养基-Polybrene溶液。用DMSO shock solution(15%DMSO in 1×HBSS)轻轻盖住细胞(60mm培养皿3mL，100mm培养皿4mL)。每次加入溶液时用手轻晃培养盘10 s，使得液体均匀分布。然后37℃孵育细胞4min。
    
  • 立即去除DMSO shock solution，用完全生长培养基轻轻清洗细胞2次。对于60mm培养皿每次用5mL培养液清洗，100mm培养皿每次用10mL培养液清洗。
    
  • 加入完全培养基到细胞中；
    
  • 蛋白表达：培养24-72h后，根据需要收集细胞进行蛋白表达情况检测。
    细胞筛选：培养24-72h后，根据细胞状态，换新鲜的选择培养基，继续进行细胞筛选。